Introduction
The E-Test (Epsilometer Test) is a quantitative antimicrobial susceptibility testing method used to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of antimicrobial agents against bacterial isolates. The test combines the simplicity of agar diffusion techniques with the ability to obtain precise MIC values. A predefined antimicrobial concentration gradient is immobilized on a plastic strip, allowing direct MIC determination after incubation.
مقدمه
تست اپسیلومتر (E-Test) یک روش کمی برای تعیین حساسیت میکروارگانیسمها به عوامل ضد میکروبی است که امکان تعیین حداقل غلظت مهارکننده رشد (MIC) را فراهم میکند. این آزمون سادگی روشهای انتشار در آگار را با قابلیت تعیین دقیق MIC ترکیب مینماید. در این روش، گرادیان مشخصی از غلظت آنتیبیوتیک بر روی یک نوار پلاستیکی تثبیت شده و پس از انکوباسیون، مقدار MIC به طور مستقیم قابل قرائت است.
Principle
When the E-Test strip is placed on the surface of an inoculated agar plate, the antimicrobial agent diffuses from the strip into the surrounding medium, creating a continuous concentration gradient. Following incubation, bacterial growth is inhibited where the antimicrobial concentration exceeds the organism’s susceptibility threshold, resulting in the formation of an inhibition ellipse. The MIC is read directly from the scale on the strip at the point where the edge of the inhibition ellipse intersects the strip.
اصول
هنگامی که نوار E-Test بر روی سطح محیط کشت تلقیحشده قرار میگیرد، آنتی بیوتیک از نوار به داخل محیط منتشر شده و یک گرادیان غلظتی پیوسته ایجاد میکند. پس از انکوباسیون، در نواحی که غلظت آنتیبیوتیک بیشتر از آستانه حساسیت میکروارگانیسم باشد، رشد باکتری مهار شده و منطقه مهار رشد به شکل یک بیضی (حالت تخم مرغی شکل) تشکیل میشود. مقدار MIC از محل تقاطع لبه هاله عدم رشد بیضی شکل با مقیاس درج شده روی نوار قرائت میگردد.
Required Materials
- E-Test strip containing the desired antimicrobial agent
- Mueller-Hinton Agar plate (or other recommended medium)
- Pure bacterial culture
- Sterile saline or broth
- Sterile cotton swab
- Sterile forceps
- McFarland turbidity standard (0.5)
- Incubator set at 35 ± 2°C
موارد مورد نیاز
- نوار E-Test حاوی آنتیبیوتیک مورد نظر
- محیط مولر هینتون آگار (یا سایر محیط های توصیه شده)
- کشت خالص از باکتری مورد آزمایش
- سرم فیزیولوژی یا محیط مایع استریل
- سواب استریل
- پنس استریل
- سوسپانسیون تهیه شده مطابق با کدورت 0.5 مک فارلند
- انکوباتور با دمای 2 ± 35 درجه سانتیگراد
Preparation of the Inoculum
Select several well-isolated colonies from a fresh pure culture and suspend them in sterile saline or broth. Adjust the turbidity of the suspension to match the 0.5 McFarland standard. Proper inoculum density is essential for obtaining reliable and reproducible MIC results.
روش تهیه سوسپانسیون میکروبی
چند کلنی مجزا و تازه از کشت خالص انتخاب کرده و در سرم فیزیولوژی یا محیط مایع استریل معلق نمایید. کدورت سوسپانسیون را مطابق با استاندارد 0.5 مک فارلند تنظیم کنید. (طول موج 360 نانومتر و جذب 0.06 تا 0.13) توجه داشته باشید که تراکم مناسب تلقیح برای دستیابی به نتایج دقیق و قابل تکرار ضروری است.
Inoculation of the Agar Plate
Dip a sterile swab into the standardized bacterial suspension and remove excess fluid. Inoculate the entire agar surface by streaking in three directions while rotating the plate between streaking steps to ensure uniform distribution of the inoculum. Allow the surface to dry for approximately 10–15 minutes before applying the strip.
نحوه تهیه کشت چمنی بر روی پلیت
سواب استریل را در سوسپانسیون استاندارد شده فرو برده و مایع اضافی را خارج کنید. سطح محیط را در سه جهت مختلف تلقیح نمایید و در هر مرحله پلیت را بچرخانید تا توزیع یکنواختی از باکتری روی سطح محیط ایجاد شود. قبل از قرار دادن نوار، اجازه دهید سطح محیط حدود 10 تا 15 دقیقه خشک شود.
Application of the E-Test Strip
Using sterile forceps, carefully place the E-Test strip on the agar surface with the concentration scale facing upward. Ensure complete contact between the strip and the agar surface. At this stage, no inhibition zone is present because antimicrobial diffusion has not yet occurred.
نحوه قرار دادن نوار اپسیلومتر بر روی پلیت
با استفاده از پنس استریل، نوار E-Test را بهآرامی روی سطح محیط قرار دهید بهگونهای که مقیاس درج شده غلظت بر روی نوار به سمت بالا باشد. اطمینان حاصل کنید که نوار به طور کامل با سطح محیط تماس دارد. در این مرحله هنوز هیچ ناحیه عدم رشدی وجود ندارد زیرا انتشار آنتیبیوتیک آغاز نشده است. در صورتی که به هر دلیل نوار در جای مناسب و مورد نظر کاربر قرار ندارد نمی توان اقدام به چابجایی نوار قرار گرفته روی پلیت نمود. لطفا از این کار اجتناب کنید.
Incubation
Invert the plate and incubate under appropriate conditions according to CLSI or EUCAST recommendations. Most non-fastidious organisms are incubated at 35 ± 2°C for 16–20 hours.
نحوه انکوباسیون ( گرمخانه گذاری)
پلیت را مطابق دستورالعملهای CLSI یا EUCAST به صورت وارونه در انکوباتور انکوبه نمایید. برای اغلب باکتریهای غیر سختگیر، انکوباسیون در دمای 2 ± 35 درجه سانتیگراد به صورت هوازی به مدت 16 تا 20 ساعت انجام میشود.
Reading and Interpretation of Results
After incubation, an inhibition ellipse will be visible around the strip. Read the MIC value directly from the scale at the point where the edge of the inhibition ellipse intersects the strip. If the intersection falls between two values, report the higher value. Interpret the MIC according to the latest CLSI or EUCAST breakpoints.
روش خواندن نتایج و گزارش نتیجه تست
پس از انکوباسیون، یک هاله بیضی شکل عدم رشد در اطراف نوار مشاهده خواهد شد. مقدار MIC را از محل تقاطع لبه هاله عدم رشد با مقیاس درج شده بر روی نوار بخوانید. در صورتی که محل تقاطع بین دو عدد قرار گیرد، می بایست مقدار بالاتر گزارش شود. توجه داشته باشید که تفسیر نتایج می بایست بر اساس آخرین جداول CLSI یا EUCAST صورت گیرد.
Quality Control
Quality control testing should be performed routinely using appropriate reference strains recommended by CLSI or EUCAST. Acceptable MIC ranges must be verified before reporting patient results.
روش کنترل کیفی نوارهای اپسیلومتر
کنترل کیفی باید به طور منظم با استفاده از سویههای مرجع توصیه شده توسط CLSI یا EUCAST انجام شود. قبل از گزارش نتایج بیماران، باید از قرار گرفتن مقادیر MIC در محدودههای قابل قبول کنترل کیفی اطمینان حاصل گردد.
Advantages of the E-Test Method
The E-Test provides accurate quantitative MIC results, is easy to perform, requires minimal specialized equipment, and demonstrates excellent correlation with reference susceptibility testing methods. It is particularly useful for fastidious organisms and situations where precise MIC determination is clinically important.
مزایای استفاده از تست اپسیلومتر
روش E-Test نتایج کمی و دقیقی از MIC ارائه میدهد، اجرای آن ساده است، به تجهیزات تخصصی محدودی نیاز دارد و همبستگی بسیار خوبی با روشهای مرجع تعیین حساسیت آنتیبیوتیکی دارد. این روش بهویژه برای باکتریهای سختگیر و مواردی که تعیین دقیق MIC از اهمیت بالینی برخوردار است، بسیار کاربردی میباشد. سرعت عمل بالا و تکرار پذیری تست از مزایای دیگر این روش می باشد.
Zist Royesh Co. | Comfort in Diagnosis
آسایش در تشخیص با استفاده از محصولات تولیدی شرکت تعاونی دانش بنیان زیست رویش
📞 Shahrekord: 09127215968
📞 Tehran: 09055197726
📞 Isfahan: 09134694535
📞 Factory: 03832281731-35
🌐 www.zistroyesh.com